1、高壓:流動(dòng)相為液體,流經(jīng)色譜柱時(shí),受到很大阻力。為了快速通過色譜柱,必須對載液施加高壓。
2、分離效率高??梢赃x擇固定相和流動(dòng)相來實(shí)現(xiàn)分離效果,這比工業(yè)蒸餾塔和氣相色譜的分離效率高很多倍。
3、高靈敏度:紫外檢測器可達(dá)到0.01ng,注入量在μL數(shù)量級(jí)之間。
4、應(yīng)用范圍廣:70%以上的有機(jī)化合物可通過液相色譜進(jìn)行分析,特別是用于高沸點(diǎn)、大分子、極性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性差的化合物的分離和分析。
5、快速分析速度和載液流速:比經(jīng)典液相色譜法快得多。通常,一個(gè)樣品的分析需要15-30分鐘,有些樣品可以在5分鐘內(nèi)完成,一般不到1小時(shí)。
實(shí)驗(yàn)樣品的處理方法:
(1)血清:血液在室溫下自然凝結(jié)10-20分鐘,離心約20分鐘。仔細(xì)收集上清液。如果儲(chǔ)存期間有沉淀,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:根據(jù)樣品要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑?;旌?0-20分鐘后,離心約20分鐘。仔細(xì)收集上清液。如果儲(chǔ)存期間有沉淀,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:用無菌管收集并離心約20分鐘。仔細(xì)收集上清液。如果儲(chǔ)存期間有沉淀,應(yīng)再次離心。胸腔積液、腹水和腦脊液應(yīng)作為參考。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清液:檢測分泌成分時(shí),用無菌管收集。離心約20分鐘。仔細(xì)收集上清液。當(dāng)檢測細(xì)胞中的成分時(shí),用PBS稀釋細(xì)胞懸浮液,細(xì)胞濃度達(dá)到約100萬/ml。通過反復(fù)冷凍和解凍,細(xì)胞被破壞,細(xì)胞內(nèi)成分被釋放。離心約20分鐘。仔細(xì)收集上清液。如果在儲(chǔ)存過程中形成沉淀,應(yīng)再次離心。